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巨噬細胞培養(yǎng)

 

巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養(yǎng),并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活23周,多用做原代培養(yǎng),難以長期生存。

巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P331、S774A.1RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。

培養(yǎng)巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法最為實用,其法如下:

1、實驗前三天,向小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯lml(勿注入腸內?。源塘鳟a生大量的巨噬細胞。
2
、引頸處死小鼠。
3
、手提鼠尾將其全浸入70%乙醇中35秒。
4
、置動物于解剖臺,用針頭固定四肢,持鑷撕開腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁,把皮膚拉向上下兩側,暴露出腹膜壁。
5
、用70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時用手指從兩側壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內流動。
6
、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側.使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內。
7
、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8
、4250g離心10分鐘后,去上清,加10ml Eagle培養(yǎng)基。
9
、計數(shù)細胞。每只鼠可產生2030×106細胞,其中90%為巨噬細胞。
10
、以3×105個貼附細胞/平方厘米接種。
11
、接種數(shù)小時后,除去培養(yǎng)液,可去除其它白細胞,純化培養(yǎng)細胞,用Eagle液沖洗12次,再加新Eagle培養(yǎng)液置CO2溫箱中。

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